Obecné zásady transgenozi
Transgenní organismy obsahují cizí DNA, která byla zavedena pomocí biotechnologie. Cizí DNA (transgen) je zde definována jako DNA z jiného druhu, jinak rekombinantní DNA ze stejného druhu, který byl v laboratoři zmanipulován a poté znovu zaveden. Pojmy transgenní organismus a geneticky modifikovaný organismus (GMO) jsou obecně synonymem., Proces vytváření transgenních organismů nebo buněk, které mají přijít celé organismy s trvalou změnou jejich zárodečné linie, se nazývá transformace nebo transfekce. (Bohužel, obě slova mají alternativní významy. Transformace také se odkazuje na proces savčí buňky stanou se rakovinné, při transfekci také se odkazuje na proces zavádění DNA do buněk v kultuře, a to buď bakteriální nebo eukaryota, pro dočasné použití, není zárodečné linie změny.) Transgenní organismy jsou důležitými výzkumnými nástroji a často se používají při zkoumání funkce genu., Transgeneze souvisí také s lékařskou praxí genové terapie, při které se DNA přenáší do buněk pacienta k léčbě onemocnění. Transgenní organismy jsou v zemědělství rozšířené. Přibližně 90% řepky, bavlny, kukuřice, sóji a cukrové řepy pěstované v Severní Americe je transgenní. V Severní Americe se v současné době nevyrábějí žádná jiná transgenní hospodářská zvířata ani plodiny (kromě některých squashů, papáji a vojtěšky).
, Aby se transgenní buňky, DNA, musí být nejprve převedeny přes buněčnou membránu, (a, pokud je přítomen, přes buněčné stěny), bez zničení buňky., V některých případech, nahé DNA (to znamená, plasmidu nebo lineární DNA, která není vázán na jakýkoliv typ nosiče), mohou být převedeny do buňky přidáním DNA do střední a dočasnému zvýšení propustnosti membrány, například pomocí elektroporace. Při práci s většími buňkami lze nahou DNA také mikroinjekcí do buňky pomocí specializované jehly. Jiné metody používají vektory k transportu DNA přes membránu. Všimněte si, že slovo „vektor“, jak se zde používá, odkazuje na jakýkoli typ nosiče, a ne pouze na plazmidové vektory., Vektory pro transformaci/transfekci patří váčky vyrobené z lipidů nebo jiné polymery, které obklopují DNA; různé typy částic, které nesou DNA, na jejich povrchu; a infekční viry a bakterie, které se přirozeně převést jejich vlastní DNA do hostitelské buňky, ale které byly vyvinuty pro přenos DNA molekuly zájmu. Obvykle cizí DNA je kompletní vyjádření jednotka, která obsahuje vlastní cis-regulačních orgánů (např. promotor), stejně jako gen, který má být přepsán.
je-li cílem experimentu vytvořit stabilní (tj., dědičný) transgenní eukaryot, cizí DNA musí být začleněna do chromozomů hostitele. Aby k tomu došlo, musí cizí DNA vstoupit do jádra hostitele a rekombinovat se s jedním z chromatidů hostitele. U některých druhů, cizí DNA se vloží na náhodné místo v chromatid, pravděpodobně kdekoli strand poškození a non-homologní end joining náhodou objevit. U jiných druhů, cizí DNA mohou být zaměřeny na konkrétní locus, lemující cizí DNA s DNA, která je homologní k hostitelské DNA na ten locus., Cizí DNA je pak začleněna do chromozomů hostitele homologní rekombinací.
Kromě toho, produkovat mnohobuněčných organismů, ve kterých jsou všechny buňky jsou transgenní a transgenu je stabilně dědičná, buňky, která byla původně přeměněna musí být buď gamet nebo se musí rozvinout do tkání, které produkují gamet. Transgenní gamety mohou být nakonec pářeny k produkci homozygotních, transgenních potomků., Přítomnost transgenu u potomků je obvykle potvrzena pomocí PCR nebo Southern blotting, a expresi transgenu lze měřit pomocí reverzně-transkripční PCR (RT-PCR), RNA blotting, a Západní (protein blotting).
rychlost transkripce transgenu je vysoce závislá na stavu chromatinu, do kterého je vložen (tj. Proto vědci často generují několik nezávisle transformovaných / transfekovaných linií se stejným transgenem a poté zobrazují řádky s nejvyšším výrazem., Je také dobrou praxí klonovat a sekvenovat transgenní lokus z nově vytvořeného transgenního organismu, protože během transformace/transfekce mohou být zavedeny chyby (zkrácení, přeskupení a další mutace).
Napsat komentář