Abstrakt
test kyseliny bicinchoninové (BCA), poprvé popsaný Smithem et al. (1) je podobný testu Lowry, protože také závisí na konverzi Cu2+ Na Cu+ za alkalických podmínek (Viz kapitola 2). Cu+ je pak detekována reakcí s BCA. Oba testy mají podobnou citlivost, ale protože BCA je stabilní za alkalických podmínek, má tato analýza tu výhodu, že může být provedena jako jednostupňový proces ve srovnání se dvěma kroky potřebnými v testu Lowry., Reakce má za následek vývoj intenzivní fialové barvy s absorpčním maximem při 562 nm. Protože výroba Cu+ v tomto testu je funkcí koncentrace proteinu a inkubace čas, obsah bílkovin neznámých vzorků může být stanoven spektrofotometricky při srovnání s známé proteinové standardy. Další výhodou testu BCA je, že je obecně tolerantnější k přítomnosti sloučenin, které interferují s testem Lowry., Zejména není ovlivněna řadou detergentů a denaturujících látek, jako je močovina a chlorid guanidinium, i když je citlivější na přítomnost redukčních cukrů. Jak standardní test (0,1–1,0 mg proteinu/mL), tak mikroanalýza (0,5–10 µg proteinu/mL) jsou popsány.
Napsat komentář