abstrakt
bicinchoninic acid (BCA) assay, først beskrevet af Smith et al. (1) ligner lo .ry-assayet, da det også afhænger af omdannelsen af Cu2+ til Cu+ under alkaliske forhold (se Kapitel 2). Cu+ detekteres derefter ved reaktion med BCA. De to analyser er af samme følsomhed, men da BCA er stabilt under alkaliske forhold, som denne analyse har den fordel, at den kan udføres som en et-trins proces i forhold til de to trin, der er nødvendige i Lowry analysen., Reaktionen resulterer i udviklingen af en intens lilla farve med et absorbansmaksimum ved 562 nm. Da produktionen af Cu+ i dette assay er en funktion af proteinkoncentration og inkubationstid, kan proteinindholdet i ukendte prøver bestemmes spektrofotometrisk ved sammenligning med kendte proteinstandarder. En yderligere fordel ved BCA-assayet er, at det generelt er mere tolerant over for tilstedeværelsen af forbindelser, der forstyrrer lo .ry-assayet., Især påvirkes det ikke af en række vaskemidler og denatureringsmidler, såsom urinstof og guanidiniumchlorid, skønt det er mere følsomt over for tilstedeværelsen af reducerende sukkerarter. Både et standard-analysen (0.1–1.0 mg protein/mL) og en mikroanalyse (0.5–10 µg protein/mL), er beskrevet.
Skriv et svar