resumen
El ensayo de ácido bicinchonínico (BCA), descrito por primera vez por Smith et al. (1) es similar al ensayo Lowry, ya que también depende de la conversión de Cu2+ a Cu+ bajo condiciones alcalinas (ver capítulo 2). El Cu + es entonces detectado por reacción con BCA. Los dos ensayos son de sensibilidad similar, pero dado que el BCA es estable en condiciones alcalinas, este ensayo tiene la ventaja de que puede llevarse a cabo como un proceso de un solo paso en comparación con los dos pasos necesarios en el ensayo Lowry., La reacción resulta en el desarrollo de un color púrpura intenso con un máximo de absorbancia a 562 nm. Dado que la producción de Cu+ en este ensayo es una función de la concentración de proteínas y el tiempo de incubación, el contenido de proteínas de muestras desconocidas puede determinarse espectrofotométricamente en comparación con estándares de proteínas conocidos. Una ventaja adicional del ensayo BCA es que generalmente es más tolerante a la presencia de compuestos que interfieren con el ensayo Lowry., En particular, no se ve afectada por una serie de detergentes y agentes desnaturalizantes como la urea y el cloruro de guanidinio, aunque es más sensible a la presencia de azúcares reductores. Se describe tanto un ensayo estándar (0,1–1,0 mg de proteína/mL) como un microensayo (0,5–10 µg de proteína/mL).
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