la depilación induce la hiperpigmentación del cabello y la piel en ratones C57BL/6j
generalmente, los folículos pilosos en la piel dorsal de los ratones muestran un primer ciclo capilar sincronizado15., Los folículos pilosos en toda la piel dorsal están típicamente en anágenos desde el día 1-12 postnatal, en catágenos desde el día 16-19, y en telógenos a partir de entonces hasta el siguiente anágeno11, 22, 23. Para visualizar los cambios en la pigmentación de la piel durante el ciclo capilar postnatal, se depilaron las regiones del tronco dorsal y la cabeza de ratones C57BL/6J en el día 11 postnatal (P11) (etapa anágena VI en el primer ciclo capilar), P21 (etapa telógena) o P30, respectivamente. Como se muestra en la Fig. 1A, toda la piel era homogéneamente negra en P11 y homogéneamente rosada en P21., Curiosamente, sin embargo, en P30, la piel del cuero cabelludo todavía era rosa, mientras que la piel de la espalda era negra (Fig. 1A). Estos datos indican que aunque McSCs en folículos de pelo del cuero cabelludo diferencian en melanocytes Maduros durante el primer ciclo del pelo, no se activan para regenerar melanocytes en un punto del tiempo cuando los folículos de pelo traseros están ya en anagen del segundo ciclo del pelo. Por lo tanto, probamos si la depilación podría activar McSCs en el cuero cabelludo en este momento., Este tratamiento de depilación indujo significativamente la expresión de factores inflamatorios, pero su nivel es mucho más bajo que el inducido por la lesión de la herida, lo que sugiere que la depilación induce solo una forma leve de lesión cutánea (Fig. S1). Curiosamente, cuando los pelos del cuero cabelludo de ratones C57BL/6J fueron depilados en P21 (como se mencionó, en la etapa telógena del primer ciclo capilar), la pigmentación del cuero cabelludo aumentó significativamente (6.06 ± 1.5 veces, n = 9) ya 7 días después, en P28 (Fig. S2A, B) y el área de depilación produjo una isla pigmentada (Fig. 1B)., En consecuencia, los cabellos regeneradores inducidos por depilación fueron hiperpigmentados (2,68 ± 0,87 veces, n = 5) en comparación con los cabellos de controles no depilados (Fig. 1C, D). Estos resultados indican que en el cuero cabelludo, la depilación puede inducir la repigmentación prematura de la piel y la hiperpigmentación del cabello.
la Depilación inducida por la piel y el cabello hiperpigmentación en ratones C57BL/6., (A) imágenes de ratones de control en las edades indicadas antes (paneles superiores) e inmediatamente después (paneles inferiores) de recorte de cabello para revelar pigmentación de la piel. Tenga en cuenta que durante el primer ciclo capilar postnatal, los colores del cuero cabelludo y la piel de la espalda difieren. Las flechas apuntan a diferentes colores de la piel del cuero cabelludo en P11 y P30. (B) cuero cabelludo de ratones depilados en P21 y observados en P28 antes (paneles superiores) o después de recortar a lo largo de la línea de puntos blancos (paneles inferiores). Las flechas apuntan al color de la piel del área recortada. C) pigmentación del cuero cabelludo después de la depilación en P21. Nota hiperpigmentación 14 días después de la depilación., Las flechas indican el color diferente entre los pelos fisiológicos y los cabellos regenerados inducidos por depilación. D) P35 tallos de pelo del cuero cabelludo y niveles de melanina de ratones de control y ratones depilados en P21. E) vello dorsal de un ratón de 1,5 años antes y después de la depilación. Las flechas indican el cambio de color del cabello antes y después de la depilación. F) tallos de pelo en la espalda (panel superior) y niveles de melanina (panel inferior) de la zona depilada y el área circundante de un ratón de 1,5 años 30 días después de la depilación. Las flechas indican el color diferente entre los pelos fisiológicos y los cabellos regenerados inducidos por depilación., *Indica p < 0.05, **indica p < 0.01.
porque los pelos se regeneran fisiológicamente en la parte posterior de los ratones C57BL/6J durante el primer ciclo capilar postnatal (Fig. 1A), también nos preguntamos si la depilación induciría cambios en la regeneración del cabello en la espalda. De hecho, 7 días después de la depilación en P21, el área depilada estaba hiperpigmentada en comparación con la no depilada (Fig. S2C, D), Al igual que los pelos regenerados individuales (Fig. S2E)., Estos datos sugieren que la hiperpigmentación inducida por la depilación no se limita al cuero cabelludo. Dadas estas observaciones, también preguntamos si los efectos de la hiperpigmentación inducida por la depilación aún funcionarían en ratones viejos. Curiosamente, los pelos regeneradores en la parte posterior de ratones de 1,5 años se hiperpigmentaron significativamente 30 días después de la depilación (1,07 ± 0,08 veces, n = 3), en comparación con los pelos en reposo sin depilar (0,84 ± 0,03) (Fig. 1E, F). Además, el análisis de HPLC mostró que la depilación induce la síntesis de eumelanina (1.79 ± 0.09 veces, n = 3) en lugar de la síntesis de feomelanina (0.97 ± 0.,12 veces, n = 3) en los pelos de la espalda (Fig. S3). Esto sugiere que la depilación induce la activación de McSCs para generar melanocitos más maduros, o aumenta la síntesis de melanina en melanocitos maduros en bulbos de pelo de ratones ancianos.
la lesión por depilación estimula la proliferación de McSC e induce la generación de melanocitos dérmicos y epidérmicos y la expresión de genes relacionados con la melanogénesis
dado que la melanogénesis está acoplada a anagen24, examinamos si la pigmentación inducida por depilación en el cuero cabelludo es causada por inducción de anágenos. Como se muestra en la Fig., 2A, los folículos pilosos inducidos por la depilación comenzaron anagen inmediatamente, mientras que en ratones de control no depilados, los folículos pilosos permanecieron en telógeno durante un período de tiempo más largo. Por lo tanto, el folículo piloso quiescente McSCs respondió a la depilación al activarse. Siete días después de la depilación, se observaron melanocitos pigmentados no solo en bulbos capilares maduros, sino también en la dermis, los orificios de los folículos pilosos y la epidermis interfolicular (Fig. 2A)., En consecuencia, se detectaron marcadores específicos de melanocitos como PMEL17 y TYR en las regiones pigmentadas inducidas por la depilación, pero no en los folículos pilosos de control (Fig. S4A). Además, los datos de western blot mostraron que los niveles de las proteínas relacionadas con la melanogénesis TYRP1 (4,22 ± 0,96 veces, n = 6) y TYR (9,75 ± 2,76 veces, n = 6) se incrementaron significativamente por depilación (Fig. S4B y S9). Los resultados sugieren que la depilación no solo activa las MCSC sino que también induce la regeneración de melanocitos para poblar las áreas interfoliculares.,
La depilación estimula la proliferación de McSC, conduce a la regeneración de melanocitos epidérmicos e induce la expresión de genes relacionados con la melanogénesis. (A) H&e tinción de distintas etapas del ciclo del cabello del cuero cabelludo 1, 4 y 7 días después de la depilación. Los ratones C57BL / 6 fueron depilados en P21 y se analizó la histología de los folículos pilosos en los días indicados., (B,C) inmunotinción Anti-MITF (B) y H&e tinción (C) de folículos pilosos de la espalda de ratones control en P28 y ratones de la misma edad depilados en P21. Las flechas indican las células MITF +(B) y los gránulos de melanina en el bulbo piloso (C). Las imágenes 3D de inmunotinción anti-MITF se muestran en la Fig. S10. (D) inmunotinción de anti-KIT y Ki67 en folículos pilosos traseros de ratones C57BL/6J 3 días después de la depilación. Tenga en cuenta que la depilación induce la proliferación de McSCs. Las flechas indican el KIT + células en la protuberancia del cabello., (E) inmunotinción anti-KIT de la piel de la espalda de ratones control en P24 y ratones de edad emparejados depilados en P21 (paneles superiores) y H&e tinción de la piel de la espalda (paneles inferiores) en el día 7 después de la depilación. Nota kit-células positivas en la epidermis 3 días después de la depilación y melanocitos pigmentados en la epidermis 7 días después de la depilación. Las flechas indican el KIT + célula (paneles superiores) y célula pigmentada (paneles inferiores). F) Los gráficos muestran el número de células Kit+ (panel izquierdo) y pigmentadas (panel derecho) en la epidermis 3 días y 7 días después de la depilación, respectivamente., DP: papila dérmica; Epi: epidermis; Der: dermis; M: melanocitos; MG: gránulos de melanina; SG: glándula sebácea; sHG: germen capilar secundario. Barra, 50 µm. *Indica p < 0.05, **indica p < 0.01.
en la piel de la espalda, 7 días después de la depilación en P21, el número total de melanocitos en cada bulbo piloso (20 ± 1.9) aumentó significativamente en comparación con la regeneración fisiológica (15.7 ± 1.4) (Fig. 2B)., En consecuencia, también hubo más melanosomas en los bulbos capilares regenerados inducidos por depilación que en los bulbos capilares fisiológicamente regenerados (Fig. 2C y Fig. S4C, D). Estos datos sugieren que la depilación indujo la hiperproliferación del McSC durante el primer ciclo capilar postnatal. De hecho, 3 días después de la depilación, la tasa de proliferación de las CCM fue mayor (el 86,2 ± 3,5% de las células fueron Ki67 positivas después de la depilación frente al 45,6 ± 3,4% de las células positivas para Ki67 en los controles) (Fig. 2D)., Curiosamente, las células KIT-positivas no se encontraron en la epidermis, pero existían en el abultamiento del cabello 1 día después de la depilación y claramente presentes en la epidermis 3 días después de la depilación (Fig. 2E y Fig. S5). El número de células Kit+ en la epidermis depilada (2,32 ± 0,72/Sección, n = 4) aumenta significativamente en comparación con la epidermis fisiológica (0,77 ± 0,68/Sección, n = 4) (Fig. 2F). En consecuencia, 7 días después de la depilación, también se encontraron células pigmentadas en la epidermis (Fig. 2E, F)., Además, RT-PCR cuantitativa 7 días después de la depilación reveló la inducción de muchos melanogénesis relacionadas con los genes, incluyendo Tyr (2.84 ± 1.13 veces por el control, n = 3), Tyrp1 (3.89 ± 0.72 veces, n = 3), Mitf (3.47 ± 0.38 veces, n = 3), Sox10 (2.13 ± 1.13 veces, n = 3), Pax3 (3.18 ± 0.43 veces, n = 3) y Ednrb (3.28 ± 0.62 veces, n = 3) (Fig. S6A). Tomados en conjunto, estos resultados sugieren que la depilación induce la proliferación de McSCs, la migración a la epidermis y la estimulación del programa de melanogénesis.,
la depilación induce la expresión de EDN3 en folículos pilosos y epidermis
entre los genes inducidos por la depilación, la EDNRB fue de especial interés por su conocida implicación en la regulación de la línea de melanocitos 1,12. Recientemente, se ha reportado que la expresión de sus ligandos Edn1 y Edn2 aumenta durante el anágeno piloso fisiológico, pero su expresión de ligando Edn3 no se vio afectada12. Por lo tanto, nos preguntamos si la depilación de los pelos de la espalda induciría estos ligandos., En confirmación de los resultados anteriores, encontramos que durante la regeneración fisiológica, la expresión de Edn1 y Edn2 se incrementaron en la piel de la espalda en P26, pero la expresión de Edn3 no mostró ningún cambio (Fig. 3A y Fig. S11). Sorprendentemente, sin embargo, la depilación no solo indujo la expresión de Edn1 y Edn2, sino también la de Edn3 (Fig. 3A), cuyo producto codificado, EDN3, ha demostrado previamente estar involucrado en el desarrollo de melanocitos 1,25,26. Por lo tanto, centramos nuestro estudio en EDN3 y su vía de señalización. Encontramos que el nivel de proteína EDN3 se incrementó significativamente en la piel depilada (D0, 0.,94 ± 0,2 veces; D3, 1,81 ± 0,09 veces; D5, 4,57 ± 0,67 veces; n = 6) pero permaneció bajo en la piel control (D0, 1,25 ± 0,47 veces; D3, 0,83 ± 0,14 veces; D5, 1,21 ± 0,2 veces; n = 6) (Fig. 3B y Fig. S12). La inmunohistoquímica mostró que en el día 1 de depilación, la proteína EDN3 se incrementó en la papila dérmica, la epidermis y el germen capilar secundario. En el día 7, también se incrementó en los orificios de los folículos pilosos (Fig. 3C). Las regiones con altos niveles de EDN3 inducidos por depilación estuvieron en estrecho contacto con las CCM en el germen capilar secundario (sHG) o con melanocitos del bulbo piloso., Usando ratones adultos heterocigotos ednrb lacZ/+, encontramos que EDNRB se expresa en melanocitos pigmentados de bulbos pilosos y en sHG, similar a la expresión de Dct-lacZ en folículos pilosos (Fig. 3D). Además, los datos de inmunotinción mostraron que las células β-Gal positivas se etiquetaron conjuntamente con las células KIT-positivas en sHG y con las células MITF-positivas en el bulbo piloso (Fig. 3E), sugiriendo que EDNRB se expresa en McSCs y melanocitos., As expected, 7 days after epilation, western blot analysis and immunostaining data showed that Ednrb-lacZ expression is significantly increased in melanocytes (Figs S6B,C and S13). These results suggest that epilation induces EDN3, which then stimulates its receptor EDNRB to regulate McSCs and melanocytes.
Epilation induces expression of endothelin-3 (Edn3) in C57BL/6 J mice. (A) RT-PCR and qRT-PCR analysis for Edns expression changes in skin after epilation., Los ratones fueron depilados en P21 y la expresión génica fue analizada en los días indicados. Los geles completos se muestran en la Fig. S11. B) análisis de Western blotting para la expresión proteica de EDN3 en la piel. Los geles completos se muestran en la Fig. S12. C) inmunofluorescencia de EDN3 en la piel del cuero cabelludo a los 0, 1, 4 y 7 días después de la depilación. Las flechas indican las células EDN3 + en los folículos pilosos. D) tinción X-gal de folículos pilosos de ratones transgénicos Dct-lacZ (paneles superiores) y ratones ednrb lacZ/+ (paneles inferiores). Las flechas indican las células lacZ + en los bulbos y bulbos del cabello., E) inmunohistoquímica de β-Gal, KIT y MITF en folículos pilosos pigmentados de ratones Ednrb lacZ/+ del día 7 postnatal. Las flechas indican el KIT y β-Gal co-células marcadas en la protuberancia (paneles superiores) y MITF y β-Gal co-células marcadas en el bulbo del cabello (paneles inferiores). EPI: epidermis; DP: papila dérmica; sHG: germen capilar secundario. Barra: 50 µm. ** Indica p < 0.01.
EDN3 es bien conocido por sus efectos en la estimulación del crecimiento y la diferenciación de los melanocitos precursors1, 25, 26., Recientemente, se ha informado que la sobreexpresión transgénica de EDN3 previene el encanecimiento del cabello causado por la epilepsia repetida27, lo que sugiere que EDN3 también afecta a McSCs. Para investigar el efecto de EDN3 en McSCs, aislamos células DCT + de epidermis E16.5 wildtype y las estimulamos con EDN3 o BQ788 (un inhibidor de EDNRB). Como se muestra en la Fig. S7A, la estimulación con EDN3 aumenta significativamente la tasa de proliferación de las células DCT+ (de 43,7 ± 2% hasta 61,4 ± 7,5%, n = 5), pero este efecto de EDN3 fue totalmente bloqueado por BQ788 (26,4 ± 1,56%, n = 5)., Con base en el hecho de que para las células no pigmentadas, DCT es un marcador específico de McSCs y que no hay melanocitos maduros en la epidermis E16.54, 28, el resultado sugiere que EDN3/EDNRB es necesario para la proliferación de McSC.
Ednrb es necesario para la depilación inducida por el pelo y la pigmentación de la piel
para evaluar la importancia de la señalización EDNRB para la depilación inducida por la hiperpigmentación de la piel, utilizamos ratones homocigotos ednrb lacZ/lacZ (Ednrb -/−). Estos ratones están en gran parte libres de células pigmentarias, pero retienen manchas pigmentadas en la base de la cabeza y la cola., Catorce días después de la depilación en la región de la cabeza, los pelos regeneradores fueron hiperpigmentados en ratones silvestres (2,41 ± 0,55 veces, n = 5) pero no en ratones Ednrb−/− (Fig. 4A, B). En ratones Ednrb−/− no depilados, los niveles de melanina de los tallos capilares fueron menores (0,51 ± 0,06 veces, n = 5) en comparación con los ratones control wildtype (1,02 ± 0,14 veces, n = 5) (Fig. 4B). Además, la repigmentación de la piel aumentó significativamente en ratones de tipo salvaje, pero solo ligeramente en ratones Ednrb−/− (Fig. 4C). Los niveles de melanina cutánea inducidos por la depilación fueron significativamente más bajos en ratones Ednrb−/− (1,85 ± 0.,79 veces, n = 9) en comparación con los ratones de tipo salvaje (5.1 ± 0.62 veces, n = 9). Estos resultados sugieren que la eliminación de Ednrb interrumpe la hiperpigmentación del cabello inducida por la depilación y la repigmentación de la piel. Además, la pérdida de EDNRB se asocia con el encanecimiento del cabello. Los niveles de melanina de los tallos de pelo pigmentados de los ratones Ednrb−/− se redujeron entre un mes de edad (0,96 ± 0,1 veces, n = 4) y hasta los 12 meses de edad (0,37 ± 0,12 veces, n = 4), en contraste con sus niveles en tallos de pelo de ratones silvestres (1,96 ± 0,17 veces, n = 4 a un mes; 2,15 ± 0,43 veces, n = 4, a 12 meses) (Fig. S7B).,
Genética y la interrupción farmacológica de Ednrb bloques de depilación inducida por el pelo y la piel de la hiperpigmentación. A) pigmentación capilar de ratones Ednrb−/− antes y después de la depilación en P21. Las flechas apuntan a los pelos pigmentados depilados (paneles de la derecha) y no depilados (paneles de la izquierda) del cuero cabelludo Ednrb−/−. B) sección histológica de pelos (paneles superiores) y contenido de melanina (panel inferior) de los tallos de pelo de ratones wildtype y Ednrb−/− antes y después de la depilación., Las flechas indican la disminución de melanina en el tallo del pelo de los ratones Ednrb−/−. (C) pigmentación del cuero cabelludo P28 de ratones wildtype y Ednrb−/− después de la depilación en P21. Las flechas apuntan al área depilada de wildtype (paneles superiores) y ednrb−/− mice (paneles inferiores). (D, E) piel posterior de ratones P26 depilados en P21 e inyectados intracutáneamente con solución salina fisiológica (paneles superiores) o BQ788 (paneles inferiores) en los días indicados por las flechas verticales (D). Las flechas blancas apuntan al color de la piel de las áreas depiladas y recortadas. E) el gráfico muestra los niveles relativos de melanina en la piel de la espalda., Tenga en cuenta que en el día 5 Después de la depilación a lo largo de la línea de puntos rojos, el recorte a lo largo de la línea de puntos blancos muestra los pelos circundantes como controles para la regeneración fisiológica de la pigmentación folicular del cabello. id, inyección intradérmica. *indica p < 0.05; **indica p < 0.01.
para examinar si la señalización EDNRB es necesaria para la hiperpigmentación inducida por depilación en la piel de la espalda, realizamos una inyección intradérmica de bq788, después de la depilación de ratones wildtype. Como se muestra en la Fig., 4D, mientras que la inyección intradérmica de control de NaCl después de la depilación permitió la hiperpigmentación de la piel (de 0.23 ± 0.06 veces hasta 1.0 ± 0.15 veces, n = 3), la inyección de BQ788 disminuyó significativamente la pigmentación de la piel inducida por la depilación (0.76 ± 0.1 veces, n = 3). Este hallazgo sugiere que la interrupción farmacológica de EDNRB puede bloquear la hiperpigmentación de la piel inducida por la depilación en la piel de la espalda. Tomados en conjunto, estos datos sugieren que la señalización EDNRB es necesaria para la hiperpigmentación inducida por depilación.,
EDNRB afecta la proliferación de McSC en los folículos pilosos y regula la expresión génica relacionada con la melanogénesis
para examinar cómo la falta de Ednrb disminuye la pigmentación de la piel, analizamos histológicamente la pigmentación de los folículos pilosos en el cuero cabelludo (que, como se mencionó, permanece pigmentada en ratones Ednrb-/− en contraste con la espalda). Como se muestra en la Fig., 5A, en el día 5 Después de la depilación, los bulbos y tallos de pelo de los ratones Ednrb−/− estaban normalmente presentes en el cuero cabelludo, pero estaban hipopigmentados en comparación con los de los ratones wildtype, lo que sugiere que la pérdida de EDNRB no afecta el ciclo del cabello, pero disminuye el número de melanocitos o la síntesis de melanina en el bulbo. De hecho, 7 días después de la depilación, el número de melanosomas de ratones Ednrb−/− fue mucho menor que el de ratones de tipo salvaje (Fig. 5B)., Además, los marcadores específicos de melanocitos como PMEL17 y TYR no pudieron detectarse en la dermis, orificios de folículos pilosos o epidermis interfolicular de ratones Ednrb−/− 5 días después de la depilación, a pesar de que estaban presentes en niveles bajos en bulbos pilosos (Fig. S7C). Además, el kit de marcadores McSC y los melanocitos pigmentados permanecieron indetectables incluso 7 días después de la depilación (Fig. 5c y Fig. S7D). Estos resultados sugirieron que el EDNRB es necesario para la regeneración epidérmica de melanocitos inducida por la depilación.,
la pérdida de EDNRB bloquea la migración de McSC a la epidermis, reduce la proliferación de melanocitos en el bulbo piloso y disminuye la expresión de algunos genes relacionados con la melanogénesis. A) Histología de los folículos pilosos del cuero cabelludo de ratones wildtype y Ednrb – / – 5 días después de la depilación. Las flechas indican gránulos de melanina en el bulbo piloso y el bulbo piloso pigmentado. B) melanosomas de ratones wildtype y Ednrb – / -en los bulbos capilares 7 días después de la depilación revelados por microscopía electrónica de transmisión (TEM)., Las flechas indican el melanosoma. C) inmunotinción anti− KIT del cuero cabelludo de ratones wildtype y Ednrb−/ – 3 días después de la depilación. Nótese la falta de células KIT-positivas en Ednrb−/− epidermis 3 días después de la depilación. D) inmunotinción anti− KIT y Ki67 de folículos pilosos de ratones wildtype y Ednrb−/-3 días después de la depilación (paneles superiores) y el gráfico cuantitativo de proliferación de melanocitos en el bulbo piloso (panel inferior). (E) imágenes de cultivos primarios de melanocitos de ratones wildtype y Ednrb−/− y (F) pellets de células correspondientes (panel superior) y contenido de melanina (panel inferior)., Las flechas apuntan al perdigón de la celda. (G) análisis qRT-PCR para la expresión de genes relacionados con la melanogénesis en la piel del cuero cabelludo de ratones wildtype y Ednrb-/− 7 días después de la depilación. Epi, epidermis; HS, tallo capilar. Barra, 50 µm. *Indica p < 0.05; **indica p < 0.01.
para analizar cómo la pérdida de EDNRB disminuye el nivel de melanina de los bulbos capilares, luego cuantificamos los números de melanocitos en cada bulbo capilar de wildtype y ednrb−/− ratones 7 días después de la depilación., El número de células MITF positivas tras la depilación fue menor en cada folículo piloso de los ratones Ednrb−/− (11,7 ± 2,2) en comparación con los folículos pilosos de los ratones salvajes (15,7 ± 1,43) (Fig. S7D). Este resultado sugirió que la pérdida de EDNRB podría bloquear la proliferación inducida por la depilación de las células del linaje de melanocitos. Recientemente, Takeo et al. se encontró que durante la regeneración fisiológica del cabello, la señalización EDNRB también es necesaria para la proliferación y el mantenimiento de Mcscs29. Sin embargo, todavía se desconoce si el EDNRB afecta la proliferación de McSC inducida por la depilación., Dado que EDN3 se expresa en la papila dérmica muy cerca de melanocitos maduros en el bulbo piloso, probamos si la señalización EDN3/EDNRB afecta la proliferación de McSC en el bulbo o estimula la síntesis de melanina en los melanocitos foliculares. En el cuero cabelludo, los datos de inmunotinción anti-KIT y Ki67 mostraron que 3 días después de la depilación, la proliferación de McSC en cada bulto capilar de ratones Ednrb−/− (52 ± 5.2%) fue menor que en los bultos correspondientes de ratones tipo salvaje (86.2 ± 3.5%) (Fig. 5D). Esto sugiere que EDNRB también se requiere para la proliferación McSC inducida por la depilación en el bulto del cabello.,
para obtener más información sobre los mecanismos subyacentes, aislamos melanocitos para el cultivo in vitro. Como se muestra en la Fig. 5E, la pigmentación de los melanocitos primarios Ednrb−/− de los folículos pilosos pigmentados de los ratones P6 Ednrb−/− fue menor (0,47 ± 0,1 veces, n = 5) que la de los melanocitos primarios de tipo salvaje (1,0 ± 0,1 veces, n = 5). Se obtuvieron resultados similares en pellets celulares o cuando se midió directamente el contenido de melanina (Fig. 5F). Luego analizamos si la señalización de EDNRB afectaría la expresión de genes relacionados con la melanogénesis. Como se muestra en la Fig., 5G, en el día 7 después de la depilación, la expresión de genes relacionados con la melanogénesis disminuyó en el cuero cabelludo Ednrb -/−, incluyendo la expresión de Pax3 (0,47 ± 0,07 veces, n = 3), Tyr (0,55 ± 0,05 veces, n = 3) y Tyrp1 (0,5 ± 0,02 veces, n = 3). Esto sugiere que la señalización de EDN3/EDNRB está implicada tanto en la proliferación de melanocitos como en la melanogénesis durante las respuestas regenerativas inducidas por depilación de McSCs. Tomados en conjunto, estos hallazgos indican que la depilación induce la expresión génica relacionada con la melanogénesis a través de la señalización EDN3/EDNRB y, a su vez, conduce a la hiperpigmentación de la piel y el cabello.
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