Yleiset periaatteet-transgenetiikalla
Siirtogeenisiä organismeja sisältävät vierasta DNA: ta, joka on otettu käyttöön bioteknologian avulla. Vierasta DNA: ta (siirtogeenin) on määritelty tässä DNA toisesta lajista, tai muu yhdistelmä-DNA-samasta lajista, jotka on manipuloitu laboratoriossa sitten uudelleen. Termit siirtogeeniset organismit ja geneettisesti muunnetut organismit (GMO) ovat yleensä synonyymejä., Prosessi luoda siirtogeenisiä organismeja tai soluja voi tulla koko organismeja, joilla on pysyvä muutos niiden ituradan on kutsuttu joko muutosta tai transfektion. (Valitettavasti molemmilla sanoilla on vaihtoehtoisia merkityksiä. Muutos viittaa myös prosessi nisäkkäiden solujen tulee syöpä, kun taas transfektion viittaa myös ottamassa DNA soluihin kulttuurin, joko bakteeri-tai eukaryote, tilapäinen käyttö, ei ituradan muutoksia.) Siirtogeeniset organismit ovat tärkeitä tutkimusvälineitä, ja niitä käytetään usein geenin toimintaa tutkiessa., Transgeneesi liittyy myös geeniterapian lääketieteelliseen käytäntöön, jossa DNA siirretään potilaan soluihin sairauden hoitoon. Siirtogeeniset organismit ovat yleisiä maataloudessa. Noin 90 prosenttia Pohjois-Amerikassa kasvatetuista canolasta, puuvillasta, maissista, soijapavuista ja sokerijuurikkaista on siirtogeenisiä. Pohjois-Amerikassa ei tällä hetkellä tuoteta muita siirtogeenisiä kotieläimiä tai viljelykasveja (lukuun ottamatta joitakin kurpitsoja, papaijoita ja sinimailasia).
siirtogeenisen solun muodostamiseksi DNA: ta on ensin siirrettävä solukalvon poikki (ja jos sitä on, soluseinän yli) solua tuhoamatta., Joissakin tapauksissa, alasti DNA (eli plasmidi tai lineaarista DNA: ta, joka ei ole sidottu mihinkään tyyppi, carrier) voidaan siirtää soluun lisäämällä DNA: n keskipitkän ja tilapäisesti lisätä huokoisuus kalvon, esimerkiksi dna tutkimuksista. Isompien solujen kanssa työskennellessä naku-DNA: ta voidaan myös mikrolisätä soluun erikoistuneella neulalla. Muissa menetelmissä käytetään vektoreita DNA: n kuljettamiseen kalvon poikki. Huomaa, että tässä käytetty sana ”vektori” viittaa kaikentyyppisiin kantajiin eikä vain plasmidivektoreihin., Vektorit muutos/transfektion sisältävät rakkulat valmistettu rasva-tai muita polymeerejä, jotka ympäröivät DNA; erilaisia hiukkasia, jotka kuljettavat DNA niiden pinnalla; ja tarttuvat virukset ja bakteerit, jotka luonnollisesti siirtää oman DNA: n osaksi isäntäsolun, mutta joka on suunniteltu siirtämään DNA-molekyylin kiinnostaa. Yleensä vierasta DNA: ta on täydellinen ilme yksikkö, joka sisältää oman ivy-alan sääntelyviranomaisten (esim. promoottori) sekä geeni, joka on litteroitu.
kun kokeen tavoitteena on tuottaa stabiili (ts., periytyvä) transgeeninen eukaryote, vieras DNA on sisällytettävä isännän kromosomeihin. Jotta tämä tapahtuisi, vieraan DNA: n on tultava isännän tumaan ja rekombinoitava yhden isännän kromatidin kanssa. Joillakin lajeilla vierasperäinen DNA työnnetään satunnaiseen paikkaan kromatidissa, luultavasti missä tahansa juosteen rikkoutumista ja ei-homologista liittymistä sattuu tapahtumaan. Muissa lajeissa, että vierasta DNA: ta voidaan kohdistaa tietyn lokuksen, jota reunustavat vierasta DNA: ta DNA: n kanssa, joka on homologinen isännän DNA, että locus., Tämän jälkeen vieras DNA liitetään isännän kromosomeihin homologisen rekombinaation avulla.
Lisäksi tuottaa monisoluisten organismien, jossa kaikki solut ovat siirtogeenisiä ja siirtogeenin on vakaasti perinnöllinen, solun, joka oli alun perin muuttanut täytyy olla joko sukusolujen tai on kehittyä kudoksiin, jotka tuottavat sukusoluja. Siirtogeeniset sukusolut voidaan lopulta parittaa tuottamaan homotsygoottisia, siirtogeenisiä jälkeläisiä., Siirtogeenin jälkeläisissä on tyypillisesti vahvistettu käyttäen PCR-tai Southern blotting, ja ilmaus siirtogeenin voidaan mitata käyttäen reverse-transkriptio PCR (RT-PCR) RNA-taudille, ja Länsi (proteiini blotting).
määrä transkriptio siirtogeenin on erittäin riippuvainen valtion chromatin, johon se on asennettu (eli asema vaikutukset), sekä muut tekijät. Siksi tutkijat usein luoda useita itsenäisesti muuttunut/transfektoiduissa linjat samalla siirtogeenin, ja sitten näytön rivejä, joilla on korkein ilmaus., Se on myös hyvä käytäntö klooni ja järjestyksessä siirtogeenisiä locus vasta syntyy siirtogeeninen organismi, koska virheet (truncations, uudelleenjärjestelyt ja muut mutaatiot) voidaan ottaa käyttöön aikana muutos/transfektion.
Vastaa