Tiivistelmä
bicinchoninic acid (BCA) – määritys, ensimmäinen kuvattu Smith et al. (1) on samanlainen Lowry määritys, koska se riippuu myös muuntaminen Cu2+ Cu+ emäksisissä olosuhteissa (ks. Luku 2). Tämän jälkeen Cu + havaitaan reaktiolla BCA: n kanssa. Kaksi määritykset ovat samanlaisia herkkyys, mutta koska BCA on stabiili alkali ehtoja, tämän menetelmän etuna on, että se voidaan suorittaa yksi-vaihe prosessi verrattuna kaksi askelta tarvitaan Lowry määritys., Reaktion tuloksena syntyy voimakas violetti väri, jonka absorbanssi on enintään 562 nm. Koska tuotanto Cu+ tämä määritys on tehtävä proteiini pitoisuus ja inkubaatioaika, proteiinipitoisuus tuntemattomia näytteitä voidaan määrittää spectrophotometrically verrattuna tunnetun proteiinin vaatimukset. Lisäetuna BCA-määrityksessä on se, että se on yleensä enemmän suvaitsevainen läsnäolo yhdisteitä, jotka häiritsevät Lowry määritys., Erityisesti se ei vaikuta erilaisia pesuaineita ja denaturointi aineiden, kuten urean ja guanidinium kloridi, vaikka se on enemmän herkkä läsnäolo vähentää sokereita. Molemmat standardin pitoisuus (0.1–1.0 mg proteiinia/mL) ja microassay (0.5–10 µg proteiinia/mL) on kuvattu.
Vastaa