Vasta-aineen Rakenne ja Vasta-ainefragmentteja

posted in: Articles | 0
Perinteiset Vasta-aineita

– Vasta-aineet immunoglobuliini (Ig) glykoproteiineja tuotetaan plasman soluja (B-solujen) vastauksena ulkomaisten antigeenisten molekyylien (immunogens). Ensisijainen tehtävä vasta-aineita on sitoa nimenomaan näiden ulkomaisten antigeenejä poistaa niitä ja/tai merkitä niitä tuhoaminen immuunijärjestelmää, siten suojella isäntä infektio. Vasta-aineluokkia on useita., Ensimmäinen osa tämä yhteenveto keskittyy tavanomainen full-size-vasta-aineet, IgG ja IgM luokan vasta-aineita, jotka ovat voimakkaasti käytössä lukuisia tutkimus -, diagnostiset ja terapeuttiset biolääketieteen sovelluksissa.

Perinteiset vasta-aineen rakenne

perusyksikkö perinteinen vasta-ainetesti on neljän polypeptidin yksikkö, joka koostuu kahdesta identtisestä raskas ketjut ja kaksi samanlaista valo ketjut kasassa disulfidi joukkovelkakirjalainoja. Kevyet ketjut ovat lyhyempiä, molekyylipainoltaan pienempiä kuin raskaat ketjut., Yleinen muoto vasta-aine on Y, jossa joustava sarana (interdomain) alueen keskellä Y. joustavuutta interdomain sarana alue on tärkeä kaksiarvoinen sitova vasta-aine , jolloin kaksi sitova taskut vuorovaikutuksessa antigeeninen sivustoja vaihtelevilla etäisyyksillä. Jokainen polypeptidi ketju on jatkuva alue, joka ei vaihtele merkittävästi keskuudessa vasta-aineita, ja vaihteleva alue, joka on kunkin erityistä vasta-ainetta. Valoketjumuuttujan alueen yhteinen notaatio on VL ja valoketjuvakion alueen CL (Kuva 1)., Merkintä on samanlainen raskas ketju muuttuja (VH) ja jatkuva alueilla (CH) kanssa CH1, CH2 ja CH3 ilmaiseva eri vakio alue verkkotunnukset raskaan ketjun. Hiilihydraatit ovat normaalisti kiinni raskaiden ketjujen CH2-domeeneissa. Fragmentti crystallizable (Fc) alueella on vain jatkuva alueilla raskaiden ketjujen (CH), mutta fragment antigen-binding region (Fab) sisältää sekä vakio domain ja muuttujan aloilla sekä raskaat ja kevyet ketjut (VH ja CL). Fragmenttimuuttujan FV alue sisältää vain kaksi muuttuvaa verkkotunnusta (Kuva 1)., Katso hiiren vasta-aine immunoglobuliini-isotyyppejä, alaluokkia ja immunoglobuliini-domeenien lukumäärää käsittelevästä keskustelusta.

Kuva 1. Tavanomaisen täysikokoisen vasta-aineen (vasen paneeli) ja yhteisten vasta-ainekappaleiden (oikea paneeli) perusrakenne.

jokaisesta täydellisestä vasta-aineesta on kaksi antigeenia sitovaa taskua, jotka sijaitsevat FV-alueilla ja voivat sitoutua kahteen antigeeniin (bivalentti sitoutuminen)., Jos kaksi antigeenia ovat kuitenkin liian lähellä (≤3 nm) tai liian kaukana toisistaan (≥29nm), vasta-aine voi sitoutua vain yhteen antigeeniin (monovalenttiseen sitoutumiseen) . Monovalenttien ja bivalenttien sidosten välillä tapahtuu merkittävä affiniteettimuutos, jossa Kd-arvot muuttuvat 1 500-kertaisesti .

rakenne erityisiä vasta-aineita on saatavilla Rakenteellisia Vasta-Tietokanta (SAbDab), kuratoinut tietokanta julkisesti saatavilla vasta rakenteita sekä rakenteen mallintamiseen työkaluja, jotka päivitetään viikoittain Protein Data Bank (PDB) .,

Perinteiset vasta-sovelluksia

Tavanomainen full-size-vasta-aineita on hyödynnetty tutkimus-proteiinin tunnistamiseen kautta Western blot analyysit , immunohistokemia , ja entsyymi-immunologiset määritykset (ELISA-testit) vuosikymmeniä. Full-size-vasta-aineita on kehitetty myös diagnostisiin sovelluksiin, kuten raskauden testit ja havaitseminen bakteerit ja virukset verestä, kuten ELISA-testi, joka havaitsee HIV. Lisäksi tavanomaisia täysikokoisia vasta-aineita käytetään yleisesti tautiterapiassa., Esimerkiksi Infliksimabi on yksi vasta-monia saatavilla, että tunnistaa tuumorinekroositekijä alfa (Tnf) ja sitä käytetään hoitoon Crohnin tauti ja nivelreuma . Trastutsumabin tai Herceptiniä, on vasta-aine, joka sitoutuu epidermaalisen kasvutekijän reseptori 2 ja käytetään metastasoituneen rintasyövän . On olemassa myös useita vasta-pohjainen hoitojen, mukaan lukien Muromonab , kun otetaan huomioon, että elinsiirto estää siirteen hylkimistä.,

Vaikka perinteiset full-size-vasta-aineita voidaan käyttää terapeuttisiin sovelluksiin, on etuja ja haittoja käyttämällä täydellinen vasta-aine. Tärkeä etu perinteisiin vasta-aineita on se, Fc alueella harjoittaa kehon immuunivastetta, ja voi kohdistaa sidottu antigeenien hävittämistä varten. Tämä Fc-alue voi myös olla haitta joissakin kliinisissä sovelluksissa, koska immuunivaste, että se tyypillisesti saa aikaan voi olla haitallista potilaan terveydelle., Lisäksi täysikokoiset vasta-aineet eivät voi tunkeutua hyvin tiettyihin kudoksiin suhteellisen suuren kokonsa vuoksi . Joissakin tapauksissa, kun käytetään täysikokoisia vasta-aineita diagnostisissa sovelluksissa, Fc-verkkotunnus voi aiheuttaa merkittävää epäspesifistä sitoutumista, mikä voi heikentää havaitsemissovelluksia.

vasta-ainepitoisuudet

monissa sovelluksissa vasta-ainepitoisuudet ovat suositeltavia. Vasta-ainekappaleita voidaan tuottaa kemiallisten tai geneettisten mekanismien avulla., Kemiallinen pirstoutuminen hyödyntää pelkistävät aineet rikkoa disulfidi joukkovelkakirjojen sisällä sarana-alueen ja ruoansulatusta vasta-aineen kanssa proteaasit kuten pepsiiniä, papaiini, ja fisiini. Fragmenttien geneettinen rakenne tarjoaa mahdollisuuden luoda lukuisia fragmentteja sisältäviä molekyylejä, joilla kullakin on ainutlaatuiset sidokset ja toiminnalliset ominaisuudet.

Fab, Fab’, (Fab’)2, ja FV

Kemialliset ja proteaasi ruoansulatusta täysikokoinen IgG-tai IgM-vasta-aineiden tuotto antigeenin sitovia fragmentteja (Fab; Kuva 1), ja Fc palasia, kuului vain raskaan ketjun CH2 ja CH3 verkkotunnuksia., Biokemiallisia menetelmiä tuottaa vasta-ainefragmentteja tuottaa hyödyllisiä välineitä, diagnostisia ja terapeuttisia sovelluksia, mutta se on melko työlästä ja vaatii suuren määrän vasta-aineen lähtöaine.

antigeenin sitovia palasia tuottamien biokemiallisten ruoansulatus ovat Fab, (Fab’)2, Fab’, ja FV, joista puuttuu Fc-alueella. Yksiarvoinen F(ab) palasia on yksi antigeenin sitoutumiskohta, kun taas kaksiarvoisen (Fab)2 palasia on kaksi antigeenin sitovia alueiden, jotka ovat sidoksissa disulfidi joukkovelkakirjalainoja., Kaksi yksittäistä F(ab)-fragmenttia syntyy, kun täysikokoinen vasta-aine pilkkoutuu papain-entsyymin avulla. F(ab’)2-katkelma, joka säilyttää osan saranan alueesta, tuotetaan IgG-tai IgM-vasta-aineiden pilkkoutumalla pepsiiniksi. Vähentäminen F(ab’)2-fragmentit, tuottaa 2 yksiarvoinen Fab-fragmentit, jotka ovat vapaan sulfhydryyliryhmän, joka on hyödyllinen konjugaatio muihin molekyyleihin. FV-fragmentit ovat pienin IgG-ja IgM-luokan vasta-aineiden entsymaattisesta pilkkoutumisesta tehty fragmentti (Kuva 1)., FV palasia on antigeenin sitoutumiskohta on tehty VH-ja VL-alueilla, mutta heillä ei ole jatkuvaa alueilla Fab (CH1 ja CL) alueilla (Kuva 1, oikea paneeli). Myös VH-ja VL-pidetään yhdessä FV palasia ei-kovalenttisia vuorovaikutuksia. Fragmentit voidaan tuottaa kautta kaupallisesti saatavilla sarjat, esimerkiksi, F(ab’)2 Pirstoutuminen Pakki G-Biosciences .,

scFv, diabody, triabody, tetrabody, Bis-scFv, minibody, Fab2, Fab3

geenitekniikan menetelmät mahdollistavat tuotannon single chain variable fragmentteja (scFv), jotka ovat FV tyyppi palasia, jotka koostuvat VH-ja VL-verkkotunnukset sidoksissa suunniteltu joustava linkkeri peptidi (Kuva 1) . V-domeenien orientaation ja linkerin pituuden manipulointi luo erilaisia FV-molekyylien muotoja . Kun linkitys on vähintään 12 jäämiä pitkä, scFv-fragmentit ovat ensisijaisesti monomeerisiä (kuten Kuvassa 1) ., Linkkerit, jotka ovat 3-11 jäämiä pitkä tuottaa scFv molekyylejä, jotka eivät pysty taittumaan funktionaalinen FV domain. Nämä molekyylit liittyvät toiseen scFv-molekyyliin, joka luo bivalentin diabodian . Jos linkkerin pituus on alle kolme jäämää, scFv-molekyylit yhdistyvät triabodioiksi tai tetraodioiksi . Esimerkiksi Tao Y et al syntyy VH-VL diabody lyhyt GGGGS linkitys-ja scFv pitkä GTTAASGSSGGSSSGA linker ., Moniarvoinen scFvs hallussaan suurempi toiminnallinen sitova affiniteetti niiden kohde-antigeenejä seurauksena ottaa kaksi enemmän kohde-antigeenin sitovia sivustoja, joka vähentää off-kurssi vasta-aineen fragmentti . Pikkubodiat ovat scfv-CH3-fuusioproteiineja, jotka kerääntyvät bivalenteiksi dimeereiksi . Pieni scFv-fragmentit, jossa on kaksi eri muuttujaa verkkotunnukset voidaan tuottaa tuottaa bispesifisen bis-scFv-fragmentit, jotka kykenevät sitomaan kaksi eri epitopes samanaikaisesti . Geneettisiä menetelmiä käytetään myös luoda bispesifisen Fab-dimeerit (Fab2) ja trispecific Fab trimers (Fab3) ., Nämä vasta-ainefragmentteja pystyvät samanaikaisesti sitova 2 tai 3 eri antigeenejä, vastaavasti.

Camelid/shark vasta-aineita ja nanobodies

lisäksi perinteiset vasta-aineita, camelid ja hai (squalidae) lajit sisältävät osajoukko erikoinen Raskaan Ketjun Vasta-aineita (hcAb) yksinomaan koostuu raskaan ketjun homodimers puuttuu valo ketjut . Fab osia näistä vasta-aineita, kutsutaan VHH vuonna kamelieläinten kasvatus ja VNAR hait, ovat pienimmät antigeenin sitovia alueiden luonnollisesti löytyy ., Nanobodies ovat VHH-johdettu yhdistelmä verkkotunnuksia voi sitoa antigeenejä, usein kloonattu VHH faagin kirjastot, kuten niitä vastaan betacoronarivus S proteiineja . Niiden sitova Termodynamiikka ja rakenteet on tutkittu (ja viittaus siihen)., Nanobodies ovat erittäin vakaa, ja se voidaan helposti tuotettu valtava määrä käyttämällä yhteisiä yksinkertainen proteiini, ilmaisujärjestelmät, kuten bakteerit (toiminnallinen tavanomainen full-size-vasta-aineita on vaikea ilmaista kunnolla bakteeri-järjestelmä), mikä edustaa lupaava työkalu tutkimus-ja hoitotarkoituksiin, etenkin super-resoluutio mikroskoopilla, massaspektrometria, ja kohdennettuja proteiinin hajoamista . Nanobodies voidaan toimittaa myös sisällä eläviä soluja kautta konjugoituu peptidejä , tai in vivo , tai ilmaisi suoraan in vivo ja tunnistaa sen tavoitteet in vivo., Nanobodies vastaan RFP tai GFP, kun konjugoitu paljon-punainen Atto väriaineita, saavuttaa 118-kertainen suurennus fluoresoivien signaalien yli GFP tai RFP, ja käytettiin tuottaa koko kehon hiiri hermosolujen yhteydet . Niitä on käytetty myös rakennetutkimuksissa proteiinien aktiivisen tilan vakauttamiseen . Ilmaus järjestelmä, jossa on useita ketjutettuja nanobodies vastaan eri kantoja influenssa tutkitaan keinona luoda universaali flunssa rokote ., Rekombinantti Anti-IgG-sekundaarisilla nanovasta-aineilla on suuri potentiaali korvata laajalti käytettyjä polyklonaalisia sekundaarisia vasta-aineita, joita tuotetaan eläimillä .

Nanobodies on ainutlaatuinen kyky ylittää veri-aivoesteen ; kuitenkin, nanobodies yleensä käsitelty ja selvitetty hyvin nopeasti kehosta . Nanobodies voidaan käyttää menetelmiä kuten immunoprecipitation, esimerkiksi, RFP-Trap MA Chromotek , tai yhdistettynä fluoresoivia proteiineja seurata solunsisäinen tavoitteet elävien solujen reaaliajassa .,

Lehmä ultralong CDR3H

Noin 10% naudan immunoglobuliinit sisältävät epätavallisen pitkän kolmas heavy-ketjun täydentävyys-määritetään alueen (CDR-3H), jossa on suuri määrä kysteiini jäämiä . Nämä kysteiinit muodostavat disulfidisidoksia, jotka johtavat vartta-ja nuppimaiseen rakenteeseen antigeenin sitoutumisalueella . Tämä poikkeuksellisen pitkä CDR3H toimialueen kanssa pitkän varren edistää monimuotoisuutta naudan vasta-aineiden spesifisyys.,

Intrabodies

Intrabodies, tai solunsisäisiä vasta-aineita, katso vasta-aineita tai niiden osia (yleensä scFv suunnittelu) ilmaisi suoraan solujen sisällä tai eläimissä in vivo läpi ilmaus vektori. Esimerkiksi Dong JX et al kehitetty useita nanobodies vastaan hermosolujen proteiinien solunsisäinen ilme, kun intrabodies . Yksi tärkeä huomio/varoitus on vähentää solunsisäisen ympäristön, joka vähentää affiniteetti vasta-aineen tai vasta-ainefragmentti, jonka sitova antigeeni on riippuvainen intradomain disulfidi joukkovelkakirjalainoja., Toinen vastike on se, että sisäisillä elimillä on taipumus laskea yhteen. Kabayama S et al suunniteltu intrabodies kanssa net engative veloittaa jopa alhaisin sytoplasman pH 6,6-tuottaa ultra-vakaa sytoplasman vasta-aineita . Farmakologisten inhibiittorien vaihtoehtoina käytetään intra-aineita tietyille endosyyttisille osallistujille., Tapauksissa, ilmaisu yhden-ketju-muuttuja fragmentti (scFv) johdettu 3B12A monoklonaalinen vasta-aine vastaan TDP-43 nuclear export signal HEK293A soluja tai sen jälkeen kohdussa dna tutkimuksista sen ilme vektori edistänyt proteolyysi ja TDP-43-aggregaatit viljellyt solut ja hiiren alkion aivot ., Virus-välitteisen toimitus osaksi hermosto on scFv vasta-aine vastaan RNA tunnustaminen kuvio 1 TDP-43 vähentää microgliosis hiirimallissa akuutin neuroinflammation ja lieventää kognitiivinen heikentyminen, moottorin vikoja, TDP-43 proteinopathy, ja neuroinflammation in siirtogeenisiä hiiriä ilmaista TDP-43 mutaatiot liittyvät amyotrofinen lateraaliskleroosi . Potentiaalia intrabodies kuin terapeuttinen menettely on edelleen syntyä.

vasta-ainefragmentti, voidaan yhdistää myös solu-tuonti tag, kuten IPTD tag , helpottaa sen pääsyä soluihin.,

Vasta-aineen fragmentti sovelluksia

Vasta-ainefragmentteja tarjota tiettyjä etuja täysikokoinen vasta joitakin sovelluksia. Nelson arvosteli tätä aihetta. Yksi etu sirpaleet yli koko-size-vasta-aineita on, että vasta-ainefragmentteja ovat pienempiä kuin perinteiset vasta-aineita ja yleensä puuttuu glykosylaatio, jolloin niiden tuotannon prokaryootti-ilmaisun järjestelmiä, jotka tarjoavat aika-ja kustannussäästöjä., Lisäksi fragmentit ovat tarpeeksi pieniä tunkeutua joitakin kudoksia, jotka täysikokoinen vasta-aineet eivät pysty tunkeutumaan, joka auttaa monia terapeuttisia ja immunohistokemiallinen menettelyjä . Lisäksi puute Fc verkkotunnus on merkittävä etu ensisijainen vasta-aineita käytetään immunohistokemia ja muut tunnistus sovelluksia, koska ne ovat huomattavasti epäspesifinen sitoutuminen Fc-reseptorin. Yksi diagnostiikassa yleisesti käytetty scFv on influenssan neuraminidaasin NC10-vasta-aine., MOC-31 vasta-aine vastaan adheesiomolekyylejä Ep-CAM on scFv yleisesti käytetty kuin syövän hoito. Diabodioilla, triabodioilla ja tetrafodioilla on potentiaalisia käyttötarkoituksia esimerkiksi radioimmunoterapiassa ja diagnostisessa in vivo-kuvantamisessa . Kuitenkin, fragmentteja, joilla ei ole Fc domain hajoavat elimistössä paljon nopeammin kuin perinteiset vasta-aineita , ja voi aiheuttaa Fc-välitteisen sytotoksisten prosesseja, elleivät ne konjugoituvat on efektori-osa , joka vaatii vielä optimointia vasta-ainefragmentti-pohjainen therapeutics.,

vaikka erilaiset vasta-ainepartikkelit tarjoavat tiettyjä etuja, niitä ei yleisesti käytetä kokeissa. Labomen käsin kuratoimissa yli 60 000 esineessä mainitaan vain muutamia vasta-Ainekappaleiden Fab-fragmenttien sovelluksia. Rochen anti-digoxigenin Fab-vasta-ainefragmentteja ( 11093274910) ja anti-fluoreseiini-Fab-vasta-ainefragmentteja ( 11426338910) syntyy lampaita ja tuotettu ruuansulatuksen kanssa papaiini. Anti-digoksigeniini Fab-fragmentteja käytettiin situ-hybridisaatioissa, koska RNA-luotaimet merkitään digoksigeniinilla ., He olivat myös tottuneet suorittaa proteiinin taitto analyysi tutkimuksen prosessi yhden calmodulin-molekyylin taitto läpi yhden molekyylin voima-spektroskopia . F(ab) fragmentteja anti-hiiri toissijainen vasta-aineita käytetään usein estää endogeenisen-hiiren Ig aikana immunostaining, esimerkiksi AffiniPure Fab-fragmentti Aasi antimouse IgG alkaen Biozol (JIM-715-007-003) .,

Invitrogen Alexa Fluor 546-konjugoitua vuohen anti-kani IgG F(ab’)2-fragmentti oli tapana suorittaa immunohistokemia tutkia roolia sFLT-1 ylläpito suonettoman photoreceptor kerros hiiri malleja ja Invitrogen Alexa Fluor 488 (Fab’)2-fragmentti kanin anti-vuohi IgG (H+L) käytettiin immunohistokemiaa tutkia mekanismi vinkki linkki uudistumista kuulo hiukset soluja .,

Fc-Reseptoreihin

Fc-reseptoreihin (FcRs) ovat molekyylejä, ilmaisi ensisijaisesti/synnynnäinen immuunijärjestelmän soluja, jotka tunnistavat ja sitovat Fc domain-vasta-aineita ja siten aloittaa solu-pohjainen immuunivastetta. Erilaisia toimintoja FcRs heijastavat monenlaisia suojaava tai moduloiva rooleja vasta-aineita, mukaan lukien välittävä neutralointi ja puhdistuma kohdennettuja alustoille, sekä ohjelmointi adaptiivisen immuniteetin ., Biologisia toimintoja FcRs säännellään immunoreceptor tyrosiini aktivoimisessa kuviot (ITAMs) ja immunoreceptor tyrosiini-pohjainen estävä kuviot (ITIMs), jotka toimivat reseptorin käyttöliittymän kanssa aktivoimalla ja estävä signalointireiteissä, vastaavasti. Näin, signalointi, jonka ITAMs voi saada solujen aktivointi, fagosytoosin ja endosytoosin, ottaa huomioon, signalointi, jonka ITIMs on estävä vaikutus solujen aktivointi . FCR-arvoja on kuvattu kaikkien immunoglobuliinien luokkien osalta, ja joitakin niistä käsitellään jäljempänä.,

IgG-reseptorit

tähän perheeseen kuuluvat FcyRI, FcyRII, Fcyrii ja niiden isoformit. He ovat vastuussa vasta-riippuvainen soluvälitteisen sytotoksisuuden (ADCC) ja vasta-aine riippuvaisen soluvälitteisen fagosytoosia (ACDP) .

toinen IgG: tä sitova reseptori on vastasyntyneen Fc-reseptori (fcrn), joka osallistuu passiivisen humoraalisen immuniteetin siirtämiseen äidiltä sikiölle. FcRn suojaa IgG: tä myös hajoamiselta in vivo selittäen niiden pitkän puoliintumisajan seerumissa ., Tämä ilmiö on johtanut kehitystä parempi terapeuttinen vasta-aineita, ottamalla käyttöön muutoksia Fc alueella edistää Fc-FcRn vuorovaikutusta.

IgE-reseptoreihin

– He ovat korkea-affiniteetti FceRI, joka kykenee sitomaan monomeerisiä IgE, ja alhainen affiniteetti C-tyyppi lektiini FceRII, joka vaikuttaa ensisijaisesti monimutkaisia IgE. FceRI välittää välitön yliherkkyys vastauksen monia allergisia reaktioita, edistää fagosytoosia ja vapauttaa erilaisia tulehdusvälittäjäaineiden on syöttösolujen ja basofiilien ., FceRII on sekä kalvo-sidottu muoto, joka tarjoaa downregulating signaali IgE-synteesiä , sekä liukoinen palasia, jotka tuottavat vastapuolen säätelyä on IgE-synteesiä . Sen rooli transcytosis IgE-allergeeni komplekseja ihmisen hengitysteiden ja suoliston epiteelin on aktiivisesti tutkitaan potentiaalinen kohde allerginen hengitysteiden tulehdus seurauksena ruoka-aineallergiat .

IgA-reseptoreihin

ainoa jäsen IgA-reseptorin ryhmä, FcaRI, on ilmaistu vain solujen myelooinen linjaa., Sillä on merkitystä sekä pro-että anti-inflammatorisissa vasteissa riippuen IgA-sidoksen tilasta. Kun sitova sekretorinen IgA (SIgA) läsnä limakalvon sivustoja on anti-inflammatorisia vaikutuksia, mukaan lukien ehkäisyyn taudinaiheuttaja hyökkäys, sitova seerumin IgA johtaa tulehduksellinen vastauksia. FcaRI säätelee myös neutrofiilien elinkelpoisuutta tulehduksellisesta mikroympäristöstä riippuen .

TRIM21

TRIM21 voidaan erottaa muista FcRs, koska se osoittaa laaja vasta-aineiden spesifisyys. Se voi sitoa IgG: n, IgM: n ja IgA: n . Sitä ilmentävät myös useimpien histogeenisten lineagien solut ., TRIM21 osallistuu vasta-aine-välitteisen häiriöitä virusreplikaatioon kohdentamalla sytosolisen virus-vasta-aine komplekseja proteasomal hajoamista.

Lieventävät Fc Sitova

Sitovat Fc verkkotunnuksia FcRs voi olla ei-toivottuja vaikutuksia monoklonaalinen vasta-aine-pohjainen analyyttinen menetelmiä, kuten immunohistokemia (IHC), fluoresenssi-aktivoida solun lajittelu (FACS) ja chromatin immunoprecipitation (Siru). Ei-spesifinen sitoutuminen FCR-standardeihin voi aiheuttaa taustamelua, joka voi johtaa väärien positiivisten havaitsemiseen., Ratkaisuja tämän ongelman ratkaisemiseksi käyttää myös (i) isotype säätimet gating, (ii) seerumin yleisesti kilpailla nykytiedon mukaan ei‐erityisiä sitovia, tai (iii) puhdistettu IgG-lohko Fc-reseptoreihin, erityisesti . Innovex Fc-Reseptorin salpaaja #NB309 voidaan estää parafiinia tai jäädytetty kohdat aikana IHC-tai IC-kokeiluja tai BD Biosciences #553142 , Miltenyi Biotec Fc-reseptorin lohko virtaussytometria. Esimerkiksi, Chopra S et al estänyt FcyR sitova 5 µg/ml TruStain fcX: n (anti-mouse CD16/32, klooni 93) alkaen BioLegend aikana virtaussytometria ja solujen lajittelu .,

Note

Dr. Macarena Fritz Kelly São José dos Camposista, SP, Brasiliasta, osallistui syyskuussa 2018 FC-reseptoreita koskevaan osioon.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista. Pakolliset kentät on merkitty *