principes généraux de la transgénèse
Les organismes transgéniques contiennent de l’ADN étranger qui a été introduit par la biotechnologie. L’ADN étranger (le transgène) est défini ici comme L’ADN d’une autre espèce, ou bien L’ADN recombinant de la même espèce qui a été manipulé en laboratoire puis réintroduit. Les Termes organisme transgénique et organisme génétiquement modifié (OGM) sont généralement synonymes., Le processus de création d’organismes transgéniques ou de cellules à venir d’organismes entiers avec un changement permanent de leur lignée germinale a été appelé transformation ou transfection. (Malheureusement, les deux mots ont des significations alternatives. La Transformation fait également référence au processus de cancer de la cellule de mammifère, tandis que la transfection fait également référence au processus d’introduction de L’ADN dans les cellules en culture, bactériennes ou eucaryotes, pour une utilisation temporaire, et non pour des modifications de la lignée germinale.) Les organismes transgéniques sont des outils de recherche importants et sont souvent utilisés lors de l’exploration de la fonction d’un gène., La transgénèse est également liée à la pratique médicale de la thérapie génique, dans laquelle L’ADN est transféré dans les cellules d’un patient pour traiter la maladie. Les organismes transgéniques sont très répandus en agriculture. Environ 90% du canola, du coton, du maïs, du soja et de la betterave à sucre cultivés en Amérique du Nord sont transgéniques. Aucun autre bétail ou culture transgénique (à l’exception de certaines courges, papayes et luzerne) n’est actuellement produit en Amérique du Nord.
pour fabriquer une cellule transgénique, L’ADN doit d’abord être transféré à travers la membrane cellulaire (et, le cas échéant, à travers la paroi cellulaire), sans détruire la cellule., Dans certains cas, L’ADN nu (c’est-à-dire plasmide ou ADN linéaire qui n’est lié à aucun type de support) peut être transféré dans la cellule en ajoutant de l’ADN au milieu et en augmentant temporairement la porosité de la membrane, par exemple par électroporation. Lorsque vous travaillez avec des cellules plus grandes, L’ADN nu peut également être Micro-injecté dans une cellule à l’aide d’une aiguille spécialisée. D’autres méthodes utilisent des vecteurs pour transporter L’ADN à travers la membrane. Notez que le mot « vecteur” utilisé ici se réfère à tout type de support, et pas seulement aux vecteurs plasmidiques., Les vecteurs de transformation / transfection comprennent des vésicules faites de lipides ou d’autres polymères qui entourent l’ADN; divers types de particules qui transportent l’ADN à leur surface; et des virus et bactéries infectieux qui transfèrent naturellement leur propre ADN dans une cellule hôte, mais qui ont été conçus pour transférer toute molécule d’ADN d’intérêt. Habituellement, l’ADN étranger est une unité d’expression complète qui comprend ses propres régulateurs cis (par exemple, promoteur) ainsi que le gène à transcrire.
Lorsque l’objectif d’une expérience est de produire une, héritable) eucaryote transgénique, L’ADN étranger doit être incorporé dans les chromosomes de l’hôte. Pour que cela se produise, l’ADN étranger doit entrer dans le noyau de l’hôte et se recombiner avec l’une des chromatides de l’hôte. Chez certaines espèces, l’ADN étranger est inséré à un endroit aléatoire dans une chromatide, probablement là où la rupture des brins et la jonction des extrémités non homologues se produisent. Chez d’autres espèces, l’ADN étranger peut être ciblé sur un locus particulier, en flanquant l’ADN étranger avec de l’ADN homologue à l’ADN de l’hôte à ce locus., L’ADN étranger est ensuite incorporé dans les chromosomes de l’hôte par recombinaison homologue.
de plus, pour produire des organismes multicellulaires dans lesquels toutes les cellules sont transgéniques et le transgène est hérité de manière stable, la cellule qui a été transformée à l’origine doit être soit un gamète, soit se développer en tissus qui produisent des gamètes. Les gamètes transgéniques peuvent éventuellement être accouplés pour produire une progéniture transgénique homozygote., La présence du transgène chez la progéniture est généralement confirmée par PCR ou Southern blotting, et l’expression du transgène peut être mesurée par PCR à transcription inverse (RT-PCR), par transfert d’ARN et par Western (transfert de protéines).
Le taux de transcription d’un transgène dépend fortement de l’état de la chromatine dans laquelle il est inséré (c’est-à-dire des effets de position), ainsi que d’autres facteurs. Par conséquent, les chercheurs génèrent souvent plusieurs lignes transformées/transfectées indépendamment avec le même transgène, puis recherchent les lignes ayant la plus haute expression., Il est également recommandé de cloner et de séquencer le locus transgénique à partir d’un organisme transgénique nouvellement généré, car des erreurs (troncations, réarrangements et autres mutations) peuvent être introduites lors de la transformation/transfection.
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