Résumé
Le l’acide bicinchoninic (BCA) de dosage, d’abord décrit par Smith et coll. (1) est similaire au test de Lowry, car il dépend également de la conversion de Cu2+ en Cu+ dans des conditions alcalines (voir Chapitre 2). Le Cu+ est ensuite détecté par réaction avec le BCA. Les deux tests sont de sensibilité similaire, mais comme le BCA est stable dans des conditions alcalines, ce test a l’avantage de pouvoir être effectué en une seule étape par rapport aux deux étapes nécessaires dans le test Lowry., La réaction se traduit par le développement d’une couleur pourpre intense avec une absorbance maximale à 562 nm. Étant donné que la production de Cu+ dans ce test est fonction de la concentration en protéines et du temps d’incubation, la teneur en protéines d’échantillons inconnus peut être déterminée par spectrophotométrie par comparaison avec des étalons protéiques connus. Un autre avantage du test BCA est qu’il est généralement plus tolérant à la présence de composés qui interfèrent avec le test Lowry., En particulier, il n’est pas affecté par une gamme de détergents et d’agents dénaturants tels que l’urée et le chlorure de guanidinium, bien qu’il soit plus sensible à la présence de sucres réducteurs. Un test standard (0,1–1,0 mg de protéines/mL) et un micro-test (0,5-10 µg de protéines/mL) sont décrits.
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