A transzgenézis általános elvei
a transzgenikus organizmusok idegen DNS-t tartalmaznak, amelyet biotechnológiával vezettek be. Az idegen DNS-t (a transzgént) itt egy másik faj DNS-éként definiálják, vagy pedig ugyanazon faj rekombináns DNS-ét, amelyet a laboratóriumban manipuláltak, majd újra bevezették. A transzgenikus organizmus és a géntechnológiával módosított organizmus (GMO) kifejezések általában szinonimák., A transzgenikus organizmusok vagy sejtek létrehozásának folyamatát, hogy egész organizmusok jöjjenek létre, amelyek csíravonalának állandó változásával átalakulnak vagy transzfekciónak nevezik. (Sajnos mindkét szónak alternatív jelentése van. A transzformáció arra is utal, hogy az emlőssejtek rákossá válnak, míg a transzfekció a DNS-nek a tenyészetben, akár bakteriális, akár eukarióta sejtekbe történő bevezetésének folyamatára utal, ideiglenes használatra, nem csíravonal-változásokra.) A transzgenikus organizmusok fontos kutatási eszközök, amelyeket gyakran használnak egy gén működésének feltárásakor., A transzgenézis a génterápia orvosi gyakorlatához is kapcsolódik, amelyben a DNS átkerül a beteg sejtjeibe a betegség kezelésére. A transzgenikus szervezetek széles körben elterjedtek a mezőgazdaságban. Az Észak-Amerikában termesztett repce, gyapot, kukorica, szójabab és cukorrépa mintegy 90% – a transzgenikus. Észak-Amerikában jelenleg nincs más transzgenikus állatállomány vagy növény (kivéve néhány squash, papaya és lucerna).
transzgenikus sejt létrehozásához a DNS-t először át kell vinni a sejtmembránon (és ha jelen van, a sejtfalon) anélkül, hogy elpusztítaná a sejtet., Bizonyos esetekben a meztelen DNS (azaz plazmid vagy lineáris DNS, amely nem kötődik semmilyen hordozóhoz) átvihető a sejtbe DNS hozzáadásával a közeghez, és ideiglenesen növeli a membrán porozitását, például elektroporációval. Ha nagyobb sejtekkel dolgozik, a meztelen DNS-t egy speciális tűvel is be lehet illeszteni egy sejtbe. Más módszerek vektorokat használnak a DNS transzportálására a membránon keresztül. Ne feledje, hogy az itt használt “vektor” szó bármilyen típusú hordozóra utal, nem csak a plazmid vektorokra., Vektorok átalakítási/transfection tartalmazza hólyagok készült lipidek vagy más polimerek körül DNS; különböző típusú részecskék, melyek magukban hordozzák a DNS-t a felület; illetve a fertőző vírusok, baktériumok, ami természetesen támogatja a saját DNS-t a fogadó sejt, de ami már tervezték, hogy át nem adott DNS-molekula az érdeklődés. Általában az idegen DNS egy teljes expressziós egység, amely magában foglalja a saját cis-szabályozóit (pl. promoter), valamint az átírandó gént.
amikor egy kísérlet célja egy stabil (azaz, öröklődő) transzgenikus eukarióta, az idegen DNS-t be kell építeni a gazdaszervezet kromoszómájába. Ahhoz, hogy ez megtörténjen, az idegen DNS-nek be kell lépnie a gazdaszervezet magjába, és rekombinálnia kell a gazdaszervezet egyik kromatidjával. Egyes fajokban az idegen DNS-t véletlenszerűen egy kromatidba helyezik, valószínűleg bárhol, ahol a szál törése és a nem homológ végösszekötés történik. Más fajokban az idegen DNS egy adott helyre irányítható, azáltal, hogy az idegen DNS-t olyan DNS-vel szegélyezi, amely homológ a gazdaszervezet DNS-éhez abban a lokusban., Az idegen DNS-t homológ rekombinációval építik be a gazdaszervezet kromoszómáiba.
továbbá többsejtű organizmusok előállításához, amelyekben minden sejt transzgenikus és a transzgén stabilan öröklődik, az eredetileg átalakított sejtnek ivarsejtnek kell lennie, vagy olyan szövetekké kell fejlődnie, amelyek ivarsejteket termelnek. A transzgenikus ivarsejteket végül össze lehet párosítani, hogy homozigóta, transzgenikus utódokat hozzanak létre., A jelenléte a transzgén az utódok általában megerősítette PCR segítségével, vagy Southern blot, a kifejezés pedig a transzgén lehet mérni, fordított-transzkripciós PCR (RT-PCR), RNS eljárás, mind a Nyugati (fehérje blot).
a transzgén transzkripciójának sebessége nagymértékben függ a kromatin állapotától, amelybe behelyezik (azaz pozícióhatások), valamint más tényezőktől. Ezért a kutatók gyakran több egymástól függetlenül átalakított/transzfektált vonalat generálnak ugyanazzal a transzgénnel, majd a legmagasabb kifejezéssel rendelkező vonalak képernyőjét., Szintén jó gyakorlat a transzgenikus Lokus klónozása és szekvenciálása egy újonnan létrehozott transzgenikus szervezetből, mivel az átalakulás/transzfekció során hibák (csonkok, átrendeződések és egyéb mutációk) vezethetők be.
Vélemény, hozzászólás?