absztrakt
a bicinchoninsav (BCA) vizsgálat, amelyet először Smith et al. (1) hasonló a Lowry vizsgálathoz, mivel ez attól is függ, hogy a Cu2+ lúgos körülmények között cu+ – ra alakul-e (lásd a 2.fejezetet). A Cu+ – t ezután a BCA-val való reakcióval detektáljuk. A két vizsgálat hasonló érzékenységű, de mivel a BCA lúgos körülmények között stabil, ennek a vizsgálatnak az az előnye, hogy egylépcsős folyamatként végezhető el, összehasonlítva a Lowry vizsgálatban szükséges két lépéssel., A reakció intenzív lila szín kialakulását eredményezi, amelynek abszorbanciája legfeljebb 562 nm. Mivel a CU+ előállítása ebben a vizsgálatban a fehérjekoncentráció és az inkubációs idő függvénye, az ismeretlen minták fehérjetartalma spektrofotometriailag meghatározható az ismert fehérjeszabványokhoz képest. A BCA-vizsgálat további előnye, hogy általában toleránsabb az olyan vegyületek jelenlétével szemben, amelyek zavarják a Lowry-vizsgálatot., Különösen nem érinti számos mosószer és denaturáló szer, például a karbamid és a guanidínium-klorid, bár érzékenyebb a redukáló cukrok jelenlétére. Mind a standard vizsgálatot (0,1–1,0 mg fehérje/mL), mind a mikroassayt (0,5–10 µg fehérje/mL) írják le.
Vélemény, hozzászólás?