Abstract
Il test dell’acido bicinchoninico (BCA), descritto per la prima volta da Smith et al. (1) è simile al test di Lowry, poiché dipende anche dalla conversione di Cu2+ in Cu+ in condizioni alcaline (vedi capitolo 2). Il Cu + viene quindi rilevato dalla reazione con BCA. I due saggi sono di sensibilità simile, ma poiché BCA è stabile in condizioni alcaline, questo saggio ha il vantaggio di poter essere eseguito come un processo in una sola fase rispetto ai due passaggi necessari nel saggio di Lowry., La reazione si traduce nello sviluppo di un colore viola intenso con un’assorbanza massima a 562 nm. Poiché la produzione di Cu + in questo test è una funzione della concentrazione proteica e del tempo di incubazione, il contenuto proteico di campioni sconosciuti può essere determinato spettrofotometricamente rispetto agli standard proteici noti. Un ulteriore vantaggio del test BCA è che è generalmente più tollerante alla presenza di composti che interferiscono con il test di Lowry., In particolare non è influenzato da una gamma di detergenti e agenti denaturanti come l’urea e il cloruro di guanidinio, sebbene sia più sensibile alla presenza di zuccheri riduttori. Sono descritti sia un dosaggio standard (0,1–1,0 mg di proteine/mL) che un microassay (0,5–10 µg di proteine/mL).
Lascia un commento