Generelle prinsipper transgenesis
Transgene organismer inneholder fremmed DNA som har blitt introdusert ved hjelp av bioteknologi. Fremmed DNA (den transgene) er her definert som DNA fra en annen art, eller annet rekombinant DNA fra de samme artene som har blitt manipulert i laboratoriet så gjeninnført. Vilkårene transgene organismen og genetisk modifisert organisme (GMO) er som regel synonymt., Prosessen med å lage transgene organismer og celler skal komme hele organismer med en permanent endring i deres germline har blitt kalt enten transformasjon eller transfection. (Dessverre, begge ordene har alternative betydninger. Transformasjon, også refererer til prosessen med nukleære celle blir cancerous, mens transfection også refererer til prosessen med å innføre DNA i celler i kultur, enten bakterier og eukaryote, for en midlertidig bruk, ikke bakterie linje endringer.) Transgene organismer er viktig research-verktøy, og er ofte brukt når du utforsker en genets funksjon., Transgenesis er også knyttet til medisinsk praksis av genterapi, hvor DNA er overført til pasientens celler til å behandle sykdom. Transgene organismer er utbredt i landbruket. Ca 90% av raps, bomull, mais, soyabønner, og sukker beets dyrket i Nord-Amerika er transgene. Ingen andre transgene husdyr eller vekster (bortsett fra noen squash, papaya, og alfalfa) er i dag produsert i Nord-Amerika.
for Å lage en transgene celle, DNA må først bli overført over cellemembranen, (og, hvis den finnes, på tvers av celleveggen), uten å ødelegge cellen., I noen tilfeller, naken DNA (som betyr plasmider eller lineære DNA som ikke er bundet til en type transportør) kan overføres til cellen ved å legge til DNA-til mellomstore og midlertidig økt porøsitet av membranen, for eksempel ved electroporation. Når du arbeider med større celler, naken DNA kan også være microinjected i en celle ved hjelp av en spesialisert nål. Andre metoder for bruk vektorer til transport DNA over membranen. Merk at ordet «vector» som brukes her, refererer til alle typer transportøren, og ikke bare plasmider vektorer., Vektorer for transformasjon/transfection inkluderer blemmer laget av lipider eller andre polymerer som omgir DNA), ulike typer partikler som bærer DNA på deres overflate, og smittsomme virus og bakterier som naturlig overføring av sitt eget DNA til en verts-cellen, men som har blitt konstruert for å overføre DNA-molekyl av interesse. Vanligvis fremmed DNA er et komplett uttrykk enhet som har sin egen cis-regulatorer (f.eks. arrangøren) så vel som genet som er til å bli transkribert.
Når målet med eksperimentet er å produsere et stabilt (dvs., heritable) transgene eukaryote, fremmed DNA må innlemmes i host kromosomer. For at dette skal skje, det fremmede DNA-et må skrive inn en vert er kjernen, og rekombinere med en av vertens kromatidene. I noen arter, fremmede DNA-et er satt inn på et tilfeldig sted i en side, trolig uansett hvor strand brudd og ikke-homologe slutt å bli med skje til å skje. I andre arter, fremmed DNA kan være rettet mot en bestemt locus, ved flankerer fremmed DNA med DNA som er homologe til vertens DNA på at locus., Fremmed DNA er så innarbeidet i host kromosomer gjennom homologe rekombinasjon.
Videre, for å frembringe flercellede organismer der alle cellene er transgene og den transgene er stabilt arvet, cellen som opprinnelig ble forvandlet må være enten en gamete eller må utvikle seg til vev som produserer kjønnsceller. Transgene kjønnsceller kan til slutt bli parret å produsere homozygote, transgene avkom., Tilstedeværelsen av den transgene barn er vanligvis bekreftet ved hjelp av PCR eller Southern blotting, og uttrykket av den transgene kan måles ved hjelp av revers-transkripsjon PCR (RT-PCR), RNA-blotting, og Vestlige (protein blotting).
pris for transkripsjon av en transgene er svært avhengig av state of the chromatin inn der det er satt inn (dvs. posisjon virkninger), samt andre faktorer. Derfor, forskerne ofte generere flere uavhengig forvandlet/transfekte linjer med samme transgene, og deretter skjermen for linjene med det høyeste uttrykk., Det er også god praksis å klone og rekkefølgen de transgene locus fra en nylig generert transgene organismen, siden feil (truncations, rearrangements, og andre mutasjoner) kan bli innført under transformasjon/transfection.
Legg igjen en kommentar