Abstrakt
bicinchoninic syre (BCA) – analysen, først beskrevet av Smith et al. (1) er lik Lowry analysen, siden det avhenger også av konvertering av Cu2+ til Cu+ under alkaliske forhold (se Kapittel 2). Den Cu+ er så oppdaget ved reaksjon med BCA. De to analysene er av tilsvarende sensitivitet, men siden BCA er stabil under alkali forhold, vil denne analysen har den fordelen at det kan utføres som en ett-trinns prosess i forhold til de to trinnene som trengs i Lowry analysen., Reaksjonen resultater i utviklingen av en intens lilla farge med en maksimal absorbans ved 562 nm. Siden produksjonen av Cu+ i denne analysen er en funksjon av protein konsentrasjon og inkubasjonstid, protein innhold av ukjente prøver kan bestemmes spectrophotometrically ved sammenligning med kjente protein standarder. En ytterligere fordel av BCA analysen er at det er generelt mer tolerante til tilstedeværelsen av forbindelser som forstyrrer Lowry analysen., I særdeleshet det er ikke påvirket av et utvalg av vaskemidler og denaturing agenter som urea og guanidinium klorid, selv om det er mer følsom for tilstedeværelse av reduserende sukker. Både en standard analyse (0.1–1.0 mg protein/mL) og en microassay (0.5–10 µg protein/mL) er beskrevet.
Legg igjen en kommentar