Abstract
De bicinchonic acid (BCA) assay, voor het eerst beschreven door Smith et al. (1) is vergelijkbaar met de Lowry-test, aangezien deze ook afhankelijk is van de omzetting van Cu2+ in Cu+ onder alkalische omstandigheden (zie hoofdstuk 2). Cu+ wordt dan gedetecteerd door reactie met BCA. De twee analyses zijn van gelijkaardige gevoeligheid, maar aangezien BCA Stabiel onder alkalivoorwaarden is, heeft deze analyse het voordeel dat het als één-stapproces in vergelijking met de twee stappen in de analyse Lowry kan worden uitgevoerd., De reactie resulteert in de ontwikkeling van een intense paarse kleur met een absorptiemaximum bij 562 nm. Aangezien de productie van Cu+ in deze test een functie van eiwitconcentratie en incubatietijd is, kan het eiwitgehalte van onbekende monsters spectrofotometrisch worden bepaald in vergelijking met bekende eiwitstandaarden. Een verder voordeel van de BCA-analyse is dat het over het algemeen toleranter is voor de aanwezigheid van samenstellingen die zich in de Lowry-analyse mengen., Het wordt met name niet beïnvloed door een reeks detergentia en denatureringsmiddelen zoals ureum en guanidiniumchloride, hoewel het gevoeliger is voor de aanwezigheid van reducerende suikers. Zowel een standaardtest (0,1–1,0 mg eiwit/mL) als een microassay (0,5–10 µg eiwit/mL) worden beschreven.
Geef een reactie