Abstract
the bicinchoninic acid (BCA) assay, first described by Smith et al. (1) jest podobny do testu Lowry ' ego, ponieważ zależy również od konwersji Cu2+ do Cu+ w warunkach alkalicznych (patrz rozdział 2). Cu+ jest następnie wykrywany w reakcji z BCA. Dwa testy mają podobną czułość, ale ponieważ BCA jest stabilny w warunkach alkalicznych, ten test ma tę zaletę, że może być przeprowadzony jako proces jednoetapowy w porównaniu z dwoma etapami wymaganymi w teście Lowry ' ego., W wyniku reakcji powstaje intensywny fioletowy kolor o maksymalnej absorbancji przy 562 nm. Ponieważ wytwarzanie Cu+ w tym teście jest funkcją stężenia białka i czasu inkubacji, zawartość białka w nieznanych próbkach może być określona spektrofotometrycznie przez porównanie ze znanymi normami białkowymi. Kolejną zaletą testu BCA jest to, że jest on ogólnie bardziej tolerancyjny na obecność związków, które zakłócają test Lowry ' ego., W szczególności nie ma na nią wpływu szereg detergentów i środków denaturujących, takich jak mocznik i chlorek guanidyniowy, chociaż jest bardziej wrażliwa na obecność cukrów redukujących. Opisano zarówno standardowy test (0,1–1,0 mg białka/mL), jak i mikro test (0,5–10 µg białka/mL).
Dodaj komentarz