Abstract
The bicinchoninic acid (BCA) assay, first described by Smith et al. (1) é semelhante ao doseamento de Lowry, uma vez que também depende da conversão de 2 Um+ para Cu+ em condições alcalinas (ver Capítulo 2). The Cu+ is then detected by reaction with BCA. Os dois ensaios são de sensibilidade semelhante, mas uma vez que a ACB é estável em condições alcalinas, este ensaio tem a vantagem de poder ser realizado como um processo de uma etapa em comparação com as duas etapas necessárias no ensaio de Lowry., A reação resulta no desenvolvimento de uma cor púrpura intensa com uma absorvância máxima a 562 nm. Uma vez que a produção de Cu+ neste ensaio é função da concentração de proteínas e do tempo de incubação, o teor de proteínas de amostras desconhecidas pode ser determinado espectrofotometricamente em comparação com os padrões de proteínas conhecidos. Uma outra vantagem do ensaio BCA é que é geralmente mais tolerante à presença de compostos que interferem com o ensaio de Lowry., Em especial, não é afectada por uma série de detergentes e de desnaturantes, como a ureia e o cloreto de guanidínio, embora seja mais sensível à presença de açúcares redutores. Está descrito um doseamento padrão (0, 1–1, 0 mg de proteína/mL) e um microensaio (0, 5–10 µg de proteína/mL).
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