principii Generale de transgeneză
organisme Transgenice conțin ADN străin care a fost introdus cu ajutorul biotehnologiei. ADN-ul străin (transgena) este definit aici ca ADN de la o altă specie sau altfel ADN recombinant din aceeași specie care a fost manipulată în laborator apoi reintrodusă. Termenii organism transgenic și organism modificat genetic (OMG) sunt în general sinonime., Procesul de creare a organismelor transgenice sau a celulelor care urmează să vină organisme întregi cu o schimbare permanentă a liniei lor germinale a fost numit fie transformare, fie transfecție. (Din păcate, ambele cuvinte au semnificații alternative. Transformarea se referă, de asemenea, la procesul de celule de mamifere care devin canceroase, în timp ce transfecția se referă, de asemenea, la procesul de introducere a ADN-ului în celule în cultură, fie bacteriene, fie eucariote, pentru o utilizare temporară, Nu modificări ale liniei germinale.) Organismele transgenice sunt instrumente importante de cercetare și sunt adesea folosite atunci când explorează funcția unei gene., Transgeneza este, de asemenea, legată de practica medicală a terapiei genice, în care ADN-ul este transferat în celulele unui pacient pentru a trata boala. Organismele transgenice sunt răspândite în agricultură. Aproximativ 90% din canola, bumbacul, porumbul, soia și sfecla de zahăr cultivate în America de Nord sunt transgenice. Nu există alte animale sau culturi transgenice (cu excepția unor squash, papaya și lucernă) sunt produse în prezent în America de Nord.pentru a forma o celulă transgenică, ADN-ul trebuie mai întâi transferat pe membrana celulară (și, dacă este prezent, pe peretele celular), fără a distruge celula., În unele cazuri, ADN-ul gol (adică plasmidă sau ADN liniar care nu este legat de niciun tip de purtător) poate fi transferat în celulă prin adăugarea ADN-ului în mediu și creșterea temporară a porozității membranei, de exemplu prin electroporare. Când lucrați cu celule mai mari, ADN-ul gol poate fi, de asemenea, microinjectat într-o celulă folosind un ac specializat. Alte metode folosesc vectori pentru a transporta ADN-ul peste membrană. Rețineți că cuvântul „vector” folosit aici se referă la orice tip de purtător și nu doar la vectorii plasmidici., Vectori de transformare/transfecție includ vezicule făcut de lipide sau alți polimeri care înconjoară ADN-ul; diverse tipuri de particule care transporta ADN-ul pe suprafața lor; și infecțioase virusuri și bacterii care în mod natural transfer propriul lor ADN într-o celulă gazdă, dar care au fost proiectate pentru a transfera orice moleculă de ADN de interes. De obicei, ADN-ul străin este o unitate de Expresie completă care include propriile regulatoare cis (de exemplu, promotor), precum și gena care urmează să fie transcrisă.
atunci când obiectivul unui experiment este de a produce un stabil (adică., eucariote transgenice, ADN-ul străin trebuie încorporat în cromozomii gazdei. Pentru aceasta, ADN-ul străin trebuie să intre în nucleul gazdei și să se recombine cu unul dintre cromatidele gazdei. La unele specii, ADN-ul străin este introdus într-o locație aleatoare într-o cromatidă, probabil, oriunde rupere fir și non-omoloage end aderarea întâmpla să apară. La alte specii, ADN-ul străin poate fi direcționat către un anumit locus, prin flancarea ADN-ului străin cu ADN-ul care este omolog cu ADN-ul gazdei la acel locus., ADN-ul străin este apoi încorporat în cromozomii gazdei prin recombinare omologă.mai mult, pentru a produce organisme multicelulare în care toate celulele sunt transgenice și transgena este moștenită stabil, celula care a fost transformată inițial trebuie să fie fie un GAMET, fie trebuie să se dezvolte în țesuturi care produc gameți. Gameții transgenici pot fi în cele din urmă împerecheați pentru a produce descendenți homozigoți, transgenici., Prezența transgenei la descendenți este de obicei confirmată folosind PCR sau Southern blotting, iar expresia transgenei poate fi măsurată folosind PCR cu transcripție inversă (RT-PCR), blotting ARN și Western (blotting protein).rata transcripției unei transgene depinde în mare măsură de starea cromatinei în care este inserată (adică efecte de poziție), precum și de alți factori. Prin urmare, cercetătorii generează adesea mai multe linii transformate/transfectate independent cu aceeași transgenă și apoi ecran pentru liniile cu cea mai înaltă expresie., De asemenea, este o bună practică clonarea și secvența locusului transgenic dintr-un organism transgenic nou generat, deoarece erorile (trunchieri, rearanjări și alte mutații) pot fi introduse în timpul transformării/transfecției.
Lasă un răspuns