Abstract
Der Bicinchoninsäure (BCA) – Assay, zuerst beschrieben von Smith et al. (1) ist dem Lowry-Assay ähnlich, da er auch von der Umwandlung von Cu2+ in Cu+ unter alkalischen Bedingungen abhängt (siehe Kapitel 2). Das Cu+ wird dann durch Reaktion mit BCA nachgewiesen. Die beiden Assays sind von ähnlicher Empfindlichkeit, aber da BCA unter Alkalibedingungen stabil ist, hat dieser Assay den Vorteil, dass er als ein einstufiger Prozess im Vergleich zu den beiden Schritten durchgeführt werden kann, die in dem Lowry-Assay benötigt werden., Die Reaktion führt zur Entwicklung einer intensiven violetten Farbe mit einem Absorptionsmaximum bei 562 nm. Da die Produktion von Cu+ in diesem Assay eine Funktion der Proteinkonzentration und Inkubationszeit ist, kann der Proteingehalt unbekannter Proben spektralphotometrisch durch Vergleich mit bekannten Proteinstandards bestimmt werden. Ein weiterer Vorteil des BCA-Assays besteht darin, dass er im Allgemeinen toleranter gegenüber dem Vorhandensein von Verbindungen ist, die den Lowry-Assay stören., Insbesondere wird es nicht durch eine Reihe von Detergenzien und Denaturierungsmitteln wie Harnstoff und Guanidiniumchlorid beeinflusst, obwohl es empfindlicher auf das Vorhandensein von reduzierenden Zuckern reagiert. Sowohl ein standard-Test (0.1–1.0 mg protein/mL) und eine mikrotiterplatte (0.5–10 µg protein/mL) beschrieben werden.
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